3.5×Bis-Tris制胶缓冲液

产品货号：

KD0680

中文名称：

3.5×Bis-Tris制胶缓冲液

英文名称：

3.5×Bis-Tris Gel Buffer

产品规格：

500mL

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

Bis-Tris-SDS-PAGE凝胶电泳的成本虽高于普通的Tris-甘氨酸-SDS-PAG电泳体系，但是可以得到清晰笔直的条带。Bis-Tris-SDS-PAGE凝胶同样适用于6～400kD的蛋白电泳；电泳体系呈酸性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫键在凝胶中交联；缓冲体系中加入抗氧化剂，整个电泳过程都在还原条件下进行，有效防止二硫键的形成；小分子蛋白迁移速度慢，不易跑出凝胶，避免丢失小片段蛋白；利用LDS上样缓冲液的高pH值可以最大程度防止天冬氨酰-脯氨酰的裂解从而保证蛋白的完整性。

产品组成：

组分	规格	保存
32% Acr-Bis	120mL	2～8℃
3.5×Bis-Tris凝胶缓冲液	80mL×2	室温
APS(过硫酸铵)	1mL×5
TEMED	1mL

保存：2～8℃，有效期1年。

注意事项：

过硫酸铵(APS)为结晶性粉末，2～8℃储存，使用前每支加入1mL蒸馏水即为10% APS溶液，现配现用最佳，溶液用后-20℃可储存2个月。APS如出现严重结块应弃用。
- APS溶液常温不稳定，取用后立即放回-20℃冰箱；若发现凝胶时间延长，应更换APS溶液。
PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；可通过增加APS及TEMED的用量，加快PAGE凝胶的聚合速度，但凝胶聚合过快不利于操作。
在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。

使用方法：

以1.5mm厚mini胶为例；0.75mm厚mini胶用量减半

一、灌制分离胶

参照凝胶模具说明书，装配好模具。
取相应体积的32% Acr-Bis、3.5×Bis-Tris凝胶缓冲液和双蒸水(参照表1)在小烧杯或试管中混合。
加入10% APS溶液和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
注入模具(留少许以判断凝胶状态)，避免产生气泡，凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约1.5cm或距梳齿0.5cm，轻轻加入1mL水覆盖封胶，使分离胶表面保持平整。
静置30～60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

二、灌制浓缩胶

倒掉覆盖在分离胶上的水层。
将相应体积的32% Acr-Bis、3.5×Bis-Tris凝胶缓冲液和双蒸水(参照表2)在一个小烧杯或试管中混合。
加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
将浓缩胶溶液加至分离胶的上面(留少许以判断凝胶状态)，避免产生气泡，直至前玻璃板的顶端。
将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
静置30～60分钟，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。
进行常规电泳操作。参照说明书Bis-Tris-MES-PAGE电泳试剂盒以及Bis-Tris-MOPS-PAGE电泳试剂盒进行电泳。

附录参考：
附表1.配制8mL/1.5mm分离胶(组份体积单位mL)

制胶浓度	8%胶	10%胶	12%胶
双蒸水	3.7	3.2	2.7
32% Acr-Bis	2	2.5	3
3.5×Bis-Tris凝胶缓冲液	2.3	2.3	2.3
10% APS	0.075	0.065	0.05
TEMED	0.005	0.004	0.003

附表2.配制3mL/1.5mm浓缩胶(组份体积单位mL)：

胶浓度	4%
双蒸水	1.76
32% Acr-Bis	0.38
3.5×Bis-Tris凝胶缓冲液	0.86
10%APS	0.02
TEMED	0.004

推荐产品：

产品名称	货号	说明
Bis-Tris-MES-PAGE电泳试剂盒	KD0733	适用于Bis-Tris凝胶3.5～160kD蛋白的分离
Bis-Tris-MOPS-PAGE电泳试剂盒	KD0732	适用于Bis-Tris凝胶15～260kD蛋白的分离

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